二、二氧化碳浓度控制
1. 两种控制系统:
红外传感器( IR )或热导传感器( TCD )进行测量。两种传感器都是准确的,但都各有优缺点。热导传感器监控 CO2 浓度的工作原理是基于对内腔空气热导率的连续测量 , 输入 CO2 气体的低热导率会使腔内空气的热导率发生变化 , 这样就会产生一个与 CO2 浓度直接成正比的电信号。红外传感器( IR )它是通过一个光学传感器来检测 CO2 水平的。 IR 系统包括一个红外发射器和一个传感器,当箱体内的 CO2 吸收了发射器发射的部分红外线之后,传感器就可以检测出红外线的减少量,而被吸收红外线的量正好对应于箱体内 CO2 的水平,从而可以得出箱体内 CO2 的浓度。由于 IR 系统是通过红外线减少来确定箱内 CO2 浓度,而箱体内颗粒物能够反射或部分吸收红外线,使得 IR 系统对箱体内颗粒物的多少比较敏感,因此 IR 传感器应用在含 HEPA 空气过滤器的培养箱内比较合适,如 Heal Force (力康) HF160W 水套式培养箱就是采用的 HEPA 过滤器配合高精度 IR 传感器的配置;而 HF90 气套式培养箱采用的是高精度 TCD 传感器。
2. CO2 测量系统自动校准功能:
无论哪种 CO2 测量系统在使用一段时间后都会产生漂移,而产生漂移后直接会导致箱体内二氧化碳浓度不能稳定在我们的设定值,致使培养失败,所以我们在这里强烈建议用户在选购培养箱时必须要选择带有 CO2测量系统自动校准功能的培养箱。
目前市面上拥有此功能的二氧化碳培养箱极少,而 Heal Force (力康)牌 HF90 气套式二氧化碳培养箱能够做到。 HF90 先进的 “AUTO-START” 自动启动功能可以将培养箱自动调节到您所设定的各项工作参数,并使 CO2 浓度处于和稳定状态,保证 CO2 浓度不产生正负漂移。
3. CO2 浓度均一性:此点与温度均一性的要求类似,在此就不做赘述。
三、相对湿度
箱内湿度对于培养工作来说是一项非常重要然而又经常被忽略的因素。维持足够的湿度水平并且要有足够快的湿度恢复速度(如在开关门后)才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。目前大多数的二氧化碳培养箱是通过增湿盘的蒸发作用产生湿气的(其产生的相对湿度水平可达 95% 左右,但开门后湿度恢复速度很慢)。我们在此建议用户在选购二氧化碳培养箱的时候尽量选择湿度蒸发面积大的培养箱,因为我们知道湿度蒸发面积越大,越容易达到大相对饱和湿度并且开关门后的湿度恢复的时间越短。
Heal Force (力康)牌 HF90 二氧化碳培养箱的整个内部箱底被设计成为一个水库式底盘,这样可以做到蒸发面积大化,增强蒸发作用,水库式底盘设计使培养箱内能快速达到饱和湿度状态,且湿度恢复速度要远远高于采用水盘增湿的二氧化碳培养箱。四、防污染设计和消毒灭菌系统
污染是导致细胞培养失败的一个主要因素,因而,二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生,其主要途径都是尽量减少微生物可以生长的区域和表面,并结合自动排除污染装置来有效防止污染的产生。例如,鉴于 CO2 培养箱在使用过程中有时会伴有霉菌生长,为确保培养箱免受污染并且保证仪器箱体内的生物清洁性,相继问世了多种消毒灭菌方式,如带有紫外消毒功能的 CO2 培养箱(如 Heal Force 品牌的 HF151UV 和 HF212UV 二氧化碳培养箱);还有的设计生产了 HEPA 过滤器能过滤培养箱内空气,可过滤除去 99.97% 的 0.3 微米以上的颗粒(如 Heal Force 品牌的 HF160W 二氧化碳培养箱);此外,还开发设计了能使箱内达到高温湿热的环境从而杀死污染微生物,达到消毒灭菌目的的培养箱(如 Heal Force 品牌的 HF90 和 HF240 二氧化碳培养箱)。这些装置对于细胞培养来说是*,但选择何种清洁装置呢?首先,我们考虑的当然是各种方式的灭菌能力,紫外消毒能力是与紫外灯距离目标的距离的二次方成反比,距离越远,消毒能力越差,所以紫外消毒方式有其局限性,难以达到*灭菌的要求; HEPA 过滤器由于受到过滤膜孔径的影响,无法去除病毒和一些微小细菌,也有其局限性;相比较而言,高温消毒是目前比较有效消毒灭菌的方法,高温消毒又分为两类,一是传统的高温干热消毒,另一种是先进的高温湿热灭菌。
接下来我们重点说一下高温干热和高温湿热两种方法的优劣。高温湿热由于蒸汽潜热大,穿透力强,容易使蛋白质变性或凝固,因此该法的灭菌效率比干热灭菌法高。其原因有三: ① 蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关,含水量愈大,发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分,所以较同一温度的干热空气中易于凝固。 ② 湿热灭菌过程中蒸汽放出大量潜热,加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所需温度低,如在同一温度下,则湿热灭菌所需时间比干热短。 ③ 湿热的穿透力比干热大,使其深部也能达到灭菌温度,故湿热比干热收效好一些。所以高温消毒并不是简单的看消毒温度,主要是看是否湿热消毒。另外,从使用角度看,湿热消毒一般控制在 90°C 就能达到很*的消毒效果,整个消毒过程中培养箱内的所有附件都不用取出,可以全部进行消毒;而干热消毒为了达到较好的效果,温度一般都在 100°C 以上,在这种温度下消毒培养箱内的传感器、 HEPA 过滤器等都要在消毒过程中取出,等消毒结束再装上,这样即麻烦,附件又不能同时消毒,而且增加二次污染的几率,再者要达到 100°C 以上的高温,培养箱的加热系统的电热丝必然要加粗,这会导致培养箱的温度控制难度增加,均一性变差。所以我们建议用户在选购二氧化碳培养箱时选择含高温湿热灭菌方式的培养箱。
目前市面上有高温湿热灭菌功能的二氧化碳培养箱极少,而 Heal Force (力康)牌 HF90 气套式二氧化碳培养箱能够做到。 HF90 培养箱包含 90°C 高温湿热灭菌系统,同时配合其电解抛光不锈钢圆边圆角内腔体设计、箱内冷凝水控制系统、 CO2 进气口 HEPA 过滤、外门开关检测系统、三扇内玻璃小门等防污染设计,真真正正是一款理想的二氧化碳培养箱。
五、其它因素
二氧化碳培养箱的容积也是一个不可忽略的因素,买小了不够用,大了又浪费又占地方。二氧化碳培养箱的可选容积非常广,而且每种类型又有不同的容积可选。此时,就需要您在选购前对所需培养箱容积的范围有一个比较准确的了解,并在此基础上多预留一点空间,以保证不时之需。
此外,每一个使用者都希望所用的仪器能够方便好用,微处理控制系统和其它各种功能附件(如高温自动调节和警报装置、 CO2 警报装置、密码保护设置、自动校准系统、 LCD 显示系统等等)的运用,就使得二氧化碳培养箱的操作和控制都非常的简便。不同的微处理系统虽然名字不相同,但是其原理与控制效果则无甚区别,选购时不必太在意它们名字上的区别,关键是要自己觉得使用起来方便,容易操作。