紫外分光光度计的组成、原理和应用

紫外分光光度计组成： 

  各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。图13-14  

1.光源 

在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。         

热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 

2．单色器 

单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。 

单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。 

3.吸收池 

吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池为常用。 

4、检测器 

检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。 

5、信号显示系统 

常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。

紫外分光光度计基本原理： 

分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。 

朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl 

   式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 

紫外分光光度计应用： 

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。